გენი კლონირება არის ერთი გენის ასლი ან კლონების მიღების აქტი. ერთხელ გენური იდენტიფიცირებულია, clones შეიძლება გამოყენებულ იქნას ბევრ სფეროში ბიოსამედიცინო და სამრეწველო კვლევები. გენეტიკური ინჟინერია გენების კლონირების პროცესი ახალ ორგანიზმებში ან დნმ-ის თანმიმდევრულობის შეცვლის პროტეინის პროდუქტის შესაცვლელად. გენეტიკური ინჟინერია დამოკიდებულია იმაზე, რომ შეასრულოს შემდეგი აუცილებელი პროცედურები.
01 პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია
02 შეზღუდვა ფერმენტები
პროტეინის საინჟინროში მნიშვნელოვანია ენზიმების აღმოჩენა, რომელიც ცნობილია როგორც შეზღუდვის ენდოუნუკეზალებით. ამ ფერმენტების შემცირება დნმ კონკრეტული ადგილის მიხედვით ნუკლეოტიდის თანმიმდევრობით. ასობით განსხვავებული შეზღუდვა ფერმენტები , რომელსაც შეუძლია დნმ-ს მკაფიო ადგილას დაჭერა, იზოლირებული იქნა სხვადასხვა ბაქტერიებისგან. დნმ-ის შემცირება შეზღუდულ ფერმენტთან ერთად აწარმოებს ბევრ პატარა ფრაგმენტს, განსხვავებულ ზომებს. ეს შეიძლება გამოყოს გელი ელექტროფორეზის ან ქრომატოგრაფიის გამოყენებით.
03 ელექტროფორეზი
უჯრედის კულტიდან დნმ-ის გამწმენდა ან შეზღუდვის ფერმენტების გამოყენებით მისი შემცირება არ იქნებოდა ძალიან სასარგებლო, თუ დნმ-ის ვერ ვიზუალებდა - ანუ იპოვონ თუ არა თქვენი ექსტრაქტი რაიმე ნივთებისგან, ან რა ზომის ფრაგმენტები 'მოჭრილი მას. ერთი გზა ამისათვის არის ლარი ელექტროფორეზი. Gels გამოიყენება სხვადასხვა მიზნებისათვის, საწყისი მოჭრილი cut დნმ გამოვლენის დნმ ჩანართები და knockouts.
04 შემოგვიერთდით ორი ცალი დნმ
გენეტიკური კვლევის დროს ხშირად საჭიროა დნმ-ის ორი ან მეტი ინდივიდუალური ზომა, რათა შეიქმნას რეკომბინანტული ზოლი, ან დახუროს ცირკულაციის ზომა, რომელიც შეკუმშული იყო ფერმენტების შეზღუდვით. ფერმენტების დნმ-ლიგასმა შეიძლება შექმნას კოეფიციენტის ობლიგაციები ნუკლეოტიდის ჯაჭვებთან შორის. ამ პროცესში ასევე მნიშვნელოვანია დნმ პოლიმერაზების I და პოლიმუკოტოიდების კინაზის ფერმენტები, რაც შეესაბამება ხარვეზების შევსებას ან 5 შემანარჩუნებელ ფოსფორალირებას.
05 შერჩევა მცირე თვითმმართველობის რეპლიკაციური დნმ
დნმ-ის მცირე წრიული ნაწილაკები, რომლებიც არ არიან ბაქტერიული გენომის ნაწილი, მაგრამ შეუძლიათ თვით რეპლიკაცია, ცნობილია როგორც პლაზმადი. ხშირად ვლინდება როგორც პლაზმატები მიკროორგანიზმებს შორის გენების ტრანსპორტირებისთვის. ბიოტექნოლოგიაში, ერთხელ გენური ინტერესი გაძლიერდა და ორივე გენი და პლაზმადი შემცირდა შეზღუდვა ფერმენტების, ისინი ligated ერთად მომტანი რა არის ცნობილი როგორც recombinant დნმ. ვირუსული (ბაქტერიოფაიჯი) დნმ შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც ვექტორი, ასევე შეიძლება კოსმოსის, ბაქტერიოფაგის გენების შემცველი რეაქბინირებული პლაზმადები.
06 მეთოდი გადაადგილება ვექტორი შევიდა მასპინძელი საკანი
ვექტორზე გენეტიკური მასალის გადაცემის პროცესი, როგორიცაა პლაზმადი, ახალ მასპინძელ საკნებში, ეწოდება ტრანსფორმაციას. ეს ტექნიკა მოითხოვს, რომ მასპინძელი უჯრედები ეკოლოგიურ ცვლილებებს განიცდიან, რაც მათ "კომპეტენტურ" ან დროებით გამტარიანობის საშუალებას იძლევა. Electroporation არის ერთი ასეთი ტექნიკა. უფრო დიდი პლაზმადი, ქვედა ეფექტურობა, რომლითაც იგი აღებულია უჯრედებით. უფრო დიდი დნმ სეგმენტები უფრო ადვილად იყენებენ ბაქტერიოფაგს, რეტროვირუსულ ან სხვა ვირუსულ ვექტორებს ან კოსმოდებს, რომლებიც იყენებენ ტრანსდუცირებას. ფემინი ან ვირუსული ვექტორები ხშირად გამოიყენება რეგენერატორულ მედიცინაში, მაგრამ შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის შეყვანა ჩვენი ქრომოსომების ნაწილში, სადაც ჩვენ არ გვინდა, გართულებები და კიბოს კი.
ტრანსგენური ორგანიზმების შერჩევის მეთოდები
ყველა უჯრედი არ მიიღებს დნმ-ს ტრანსფორმაციის დროს. აუცილებელია, რომ არსებობს მეთოდები გამოვლენის ვინც გავაკეთოთ. საერთოდ, პლაზმადები ატარებენ გენების ანტიბიოტიკას წინააღმდეგობას და ტრანსგენური უჯრედების შერჩევას გენების გამოხატულებაზე და მათი საშუალებით იზრდება მედიაზე, რომელიც შეიცავს ანტიბიოტიკას. შერჩევის ალტერნატიული მეთოდები დამოკიდებულია სხვა რეპორტიორის პროტეინებზე, როგორიცაა x-gal / lacZ სისტემა, ან მწვანე ფლუორესცენციის ცილა, რომელიც საშუალებას იძლევა შერჩევა ფერისა და ფლუორესცენციის საფუძველზე.