Რა არის პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია (PCR)?

PCR დგას პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციისთვის , დნმ-ის გამარტივებულ სეგმენტებში მოლეკულური ბიოლოგიის ტექნიკით, დნმ-ის პოლიმერაზული ენზიმების გამოყენებით სხვადასხვა ასლების გამომუშავებით კონტროლირებადი პირობებით. როგორც პატარა, როგორც დნმ სეგმენტის ან გენის ერთი ეგზემპლარი შეიძლება მილიონობით ეგზემპლარად გაიზარდოს, რაც საშუალებას აძლევს საღებავებისა და სხვა ვიზუალიზაციის მეთოდების გამოყენებას.

1983 წელს განვითარებულ იქნა PCR- ის პროცესი დნმ-ის თანმიმდევრულობის შესასრულებლად და ინდივიდუალური გენების მიხედვით ნუკლეოტიდების დადგენის მიზნით.

მეთოდი იყენებს თერმული ციკლის ან განმეორებითი გათბობის და გაგრილების რეაქციის დნმ დნობისა და რეპლიკაციისთვის. როგორც PCR აგრძელებს, "ახალი" დნმ გამოიყენება როგორც თარგი რეპლიკაციისთვის და ჯაჭვური რეაქცია, რომელიც აძლიერებს დნმ-ის თარგის გაფართოებას.

PCR მეთოდები გამოიყენება ბიოტექნოლოგიის ბევრ სფეროში, მათ შორის ცილის საინჟინრო , კლონირება, სასამართლო ექსპერტიზის (დნმ თითის ანაბეჭდის), მამობის ტესტირება, მემკვიდრეობითი ან / და ინფექციური დაავადებების დიაგნოზი და გარემოსდაცვითი ნიმუშების ანალიზისთვის.

განსაკუთრებით ექსპერტიზის დროს, PCR განსაკუთრებით სასარგებლოა, რადგანაც ის ამცირებს დნმ-ის მცირე რაოდენობასაც კი. PCR ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას დნმ-ის გასაანალიზებლად, რომელიც ათასობით წლისაა და ეს მეთოდები გამოყენებულ იქნა 800,000 წლის მამულისგან მსოფლიოს ყველა კუთხიდან მუმიდან.

PCR პროცედურა შემდეგია:

• ინიციალიზაცია: ეს ნაბიჯი აუცილებელია მხოლოდ დნმ-ის პოლიმერებისთვის, რომლებიც საჭიროებენ ცხელი-დაწყების PCR- ს. რეაქცია მწვავეა 94-96 ° C- ს შორის და 1-9 წუთის განმავლობაში.

• Denaturation: თუ პროცედურა არ საჭიროებს ინიციალიზაციას, დენავრუქცია არის პირველი ნაბიჯი. რეაქცია თბება 94-98 ° C- დან 20-30 წამით. დნმ თარგის წყალბადის ობლიგაციები ჩაიშლება და იქმნება ერთჯერადი დნმ-ის მოლეკულები.
• Annealing: რეაქციის ტემპერატურა დაბალია 50-დან 65 ° C- მდე და 20-40 წამის განმავლობაში. პრაიმერები ერთჯერადი დნმ-ის თავში. ამ ეტაპზე ტემპერატურა ძალიან მნიშვნელოვანია. თუ ეს ძალიან ცხელია, პრემიერმა შესაძლოა არ შეასრულოს. თუ ეს ძალიან ცივაა, პრემიერმა შეიძლება არასწორად შეასრულოს. კარგი კავშირი იქმნება, როდესაც პრემიერის თანმიმდევრობა შეესაბამება თარგების თანმიმდევრობას.

• გაფართოება / დანამატი: ამ ეტაპზე ტემპერატურა დამოკიდებულია პოლიმერაზების ტიპის მიხედვით. დნმ პოლიმერაზას სინთეზირებს სრულიად ახალ დნმ-ს.
• საბოლოო დრეკადობა: ეს ნაბიჯი შესრულებულია 70-74 ° C- ზე საბოლოო PCR ციკლის 5-15 წუთში.
• საბოლოო ჩატარება: ეს ნაბიჯი არის სურვილისამებრ. ტემპერატურა 4-15 ° C- ზე ინახება და რეაქციას აჩერებს.

პროცედურა დაყოფილია სამ ეტაპად:

• ექსპონენციალური გაძლიერება: ყველა ციკლის განმავლობაში, პროდუქტი (დნმ-ის სპეციფიური ნაჭერია) გაორმაგებულია.
• დინამიკა-სცენა: დნმ-ის პოლიმერაზა კარგავს აქტივობას და რეაგენებს მოიხმარს რეაქცია.
• პლეიოუ: არ არის პროდუქტი აგროვებს.