როგორ აღინიშნება ეს ენდონიუსილეზები?
რამდენად იციან შეზღუდვების ფერმენტების შესახებ? მიიღეთ უკეთ გაგება, თუ რას აკეთებენ ისინი და რატომ არიან ისინი მნიშვნელოვანი, ამ მიმოხილვით.
განსაზღვრა შეზღუდვა ფერმენტები
შეზღუდვის ენდოუნუკეკლაზები წარმოადგენს დნმ-ის მოლეკულების მოჭრის ფერმენტის კლასს. თითოეული ენზიმი აღიარებს დნმ-ის ნაწილაკთა ნუკლეოტიდების უნიკალურ თანმიმდევრობას. ასეთი თანმიმდევრობები, ჩვეულებრივ, 4-დან 6-მდე ბაზური წყვილია. თანმიმდევრობები palindromic რომ შეავსებს დნმ strand აქვს იგივე თანმიმდევრობა მხოლოდ საპირისპირო მიმართულებით.
სხვა სიტყვებით რომ ვთქვათ, ორივე დნმ-იც იჭრება იმავე ადგილას.
სად არის ეს ფერმენტები
შეზღუდვა ფერმენტების გვხვდება სხვადასხვა შტამების ბაქტერიების სადაც მათი ბიოლოგიური როლი მონაწილეობა მიიღოს საკანში თავდაცვის. ეს ფერმენტები "ზღუდავს" უცხო (მაგ. ვირუსული) დნმ-ს, რომელიც უშვებს საკანში, ანადგურებს მას. მასპინძელ საკანში აქვს შეზღუდვა-მოდიფიკაციის სისტემა, რომელიც ქმნის საკუთარ დნმ-ს სპეციალურ საიტებზე სპეციფიკური შეზღუდვების ფერმენტებს, რითაც იცავს თავის cleavage. აღმოაჩინეს 800-ზე მეტი ცნობილი ფერმენტი, რომელიც 100-ზე მეტ ნუკლეოტიდის თანმიმდევრობას აღიარებს.
გამოიყენეთ ბიოტექნოლოგიაში
შეზღუდვა ფერმენტების გამოიყენება ბიოტექნოლოგიის შემცირება დნმ შევიდა პატარა strands, რათა შეისწავლოს ფრაგმენტი სიგრძე განსხვავებები შორის ინდივიდუალური (შეზღუდვა ფრაგმენტი სიგრძე პოლიმორფიზმი - RFLP). ისინი ასევე იყენებენ გენი კლონირებას.
RFLP ტექნიკა გამოყენებული იქნა იმის დასადგენად, რომ ინდივიდებს ან ჯგუფებს აქვთ გენეტიკური თანმიმდევრობით განსხვავებული განსხვავებები და გენომის გარკვეული სფეროების შეზღუდვის ნაკლოვანებები.
ამ უნიკალური სფეროების ცოდნა დნმ-ის თითის ანაბეჭდის საფუძველია . თითოეული ეს მეთოდი დამოკიდებულია აგარუსის გელი ელექტროფორეზის გამოყენებით დნმ-ის ფრაგმენტების გამოყოფისთვის. TBE ბუფერი, რომელიც შედგება Tris ბაზის, ბორის მჟავისა და EDTA- სგან, ხშირად გამოიყენება აგარის გელი ელექტროფორეზისთვის დნმ-ის პროდუქტების შესამოწმებლად.
სახის შეზღუდვები ენზიმები
არსებობს შეზღუდული ფერმენტების სამი სხვადასხვა ტიპი. ტიპი I წყვეტს დნმ შემთხვევითი ადგილას, რამდენადაც ცნობისმოყვარეობიდან 1000 ან მეტი ბაზური წყვილი. ტიპი III წყვეტს ადგილზე დაახლოებით 25 ბაზის წყვილებს შორის. I და III ტიპები საჭიროებს ATP- ს და შეიძლება იყოს მრავალი სუბ-ერთეულის მქონე დიდი ფერმენტები. ტიპი II ფერმენტები, რომლებიც ძირითადად გამოიყენება ბიოტექნოლოგიაში, დნმ-ის აღიარებული თანმიმდევრობის ფარგლებში, ATP- ს საჭიროების გარეშე და უფრო მცირე და მარტივი.
ტიპი II შეზღუდვა ფერმენტების დასახელებულია ბაქტერიული სახეობების მიხედვით, საიდანაც იზოლირებულია. მაგალითად, ეკორიზმის ფერმენტი ეკოლისგან იზოლირებული იყო. საზოგადოების უმრავლესობა იცნობს ე.კოლის ეპიდემიას საკვებიდან.
ტიპი II შეზღუდვა ფერმენტების შეიძლება წარმოქმნას ორი სხვადასხვა სახის შემცირება დამოკიდებულია თუ არა ისინი გაჭრა ორივე strands ცენტრში აღიარება თანმიმდევრობა ან ყოველი მიმართულება უფრო ახლოს ერთი ბოლოს აღიარება თანმიმდევრობა.
ყოფილი დაჭრილი გენერირებს "ბლაგვი დამთავრების" გარეშე nucleotide overhangs. ეს უკანასკნელი ქმნის "წებოვანი" ან "შეკრული" დამთავრებას, რადგან ყოველი დნმ-ის ფრაგმენტი უკავშირდება სხვა ფრაგმენტებს. ორივე სასარგებლოა მოლეკულურ გენეტიკაში, რომელიც რეკომენდებულია დნმ-ის და ცილების მიღების მიზნით.
დნმ-ის ეს ფორმა გამოირჩევა იმის გამო, რომ ის ორი ან მეტი განსხვავებული ზოლის ლიგირების (ერთობლივი კავშირის) მიერ წარმოქმნილია, რომლებიც თავდაპირველად არ იყო დაკავშირებული.