ფერმენტ კინეტიკის გაზომვა
როგორც ცოტა ფონზე, ფერმენტები არიან ცილები, რომლებიც მოქმედებს როგორც კატალიზატორები შემცირების მიზნით აქტივაციის ენერგია რეაქცია მოხდეს. აქტივაცია ენერგია არის ენერგია, რომელიც აუცილებელია რეაქციების მისაღებად, რადგან ბევრი რეაქცია არ არის ძალიან სწრაფად (ან საერთოდ მოხდეს) თუ ისინი თერმოდინამიკურად შესაძლებელია.
ფერმენტები კონკრეტულ რეაქციებზე მკვეთრად გამოხატავს კონკრეტულ ობიექტში (ცნობილი აქტიური საიტია), სადაც რეაქციონები აკმაყოფილებენ და რეაგირებენ პროდუქციის გენერირებაზე. Substrates აქვს აქტიური საიტები, რომლებიც სპეციფიკურია მხოლოდ მათთვის, რომ სხვა ნივთიერებები არ ემორჩილებიან ან რეაგირებენ იგივე ადგილზე. ჩაკეტვისა და გასაღების მსგავსად, თითოეული ფერმენტი მხოლოდ ერთ კონკრეტულ რეაქციას ახდენს (ზოგიერთი გამონაკლისის გარდა).
სპეციფიკური აქტივობა გამოიყენება ცილის იზოლაციის მეთოდებში, რათა აღინიშნოს გამწმენდი პროცენტული მაჩვენებლები. მნიშვნელოვანია იცოდეს ეს ერთეული, როდესაც შეძენით ფერმენტები, ზუსტად მიუთითეთ იმაზე, თუ რამდენად იღებთ სუფთა ფერმენტს.
ფერმენტური კინეტიკის გაზომვისას (სუბსტრატის ან ზედაპირის მქონე ფერმენტის რეაქციის მაჩვენებელი), კონკრეტული აქტივობა განისაზღვრება როგორც ფერმენტის კონცენტრაციის სუბსტრატის რაოდენობა (რეაქციები კატალიზირებული), თითო მგ პროტეინზე ფერმენტული მომზადების დროს, ერთჯერადად.
კონკრეტული საქმიანობის მაგალითი იქნება:
- იზოლირებული ფერმენტის კონკრეტული აქტივობა შეფასდა 150 umoles / min / mg პროტეინზე ადრე გამწმენდი და 800 umoles / min / mg, გაწმენდის შემდეგ.
სპეციფიკური აქტივობა მნიშვნელოვანია ფერმენტის სისუფთავე. სუფთა ფერმენტის სხვადასხვა პაკეტები უნდა ჰქონდეთ იმავე ღირებულებებსა და ფერმენტული ხსნარის გაწმენდას, ბევრჯერ ექნება იდენტური კონკრეტული აქტივობის ღირებულებები, მიუხედავად იმისა, რომ იქნება სხვადასხვა ფერმენტის აქტივობის ღირებულებები. ეს იმიტომ ხდება, რომ კონკრეტული აქტივობის გაანგარიშების შემთხვევაში, მრიცხველი (ერთეულები / მლ) და დენომენიტორი (მგ / მლ) თანაბრად განიცდიან.
კონკრეტული საქმიანობა ძალიან განსხვავდება აქტივობისგან, მაგრამ კონკრეტული საქმიანობის გაანგარიშება კვლავ დამოკიდებულია აქტივობაზე. ეს იმას ნიშნავს, რომ აღნიშნული კონკრეტული აქტივობის ღირებულება ასევე დამოკიდებულია ფერმენტის ერთეულის განსაზღვრაზე.
ფერმენტების ბეჩები, რომლებიც უფრო ნაკლებია, ვიდრე მოსალოდნელია კონკრეტული აქტივობის მნიშვნელობა, შეიძლება შეიცავდეს იმ ფერმენტურ მოლეკულებს, რომლებიც შეცვლილია ან შერეულია მინარევებით.
ფაქტორები, რომლებიც გავლენას ახდენენ ფერმენტის აქტივობაზე
შესაძლებელია, რომ ერთი ფერმენტის შეიძლება ჰქონდეს სხვადასხვა გაზომვის აქტივობის ღირებულებები, როდესაც იზომება სხვადასხვა ლაბორატორიებში (ეს არის რეალური განსხვავებები იზომება აქტივობაში, არ არის აშკარა განსხვავებები გამოწვეული სხვადასხვა ერთეულების განმარტებებით).
როგორც წესი, ჩატარდება (საკვლევი მეთოდი ფერმენტების სიწმინდის დასადგენად) გავლენას მოახდენს მოქმედებების ღირებულებებზე. მაგალითად, ფერმენტები ზოგადად უფრო აქტიურია ტემპერატურის 37 გრადუსზე ტემპერატურაზე 20 გრადუსთან შედარებით, ასე რომ, თუ გამოკვლევა გრძელდება 21 გრადუსზე, ღირებულებები განსხვავდება ტემპერატურაზე 32 გრადუსამდე ტემპერატურაზე (ჩვეულებრივ, , აყვანა ხდება ტემპერატურაზე 20-37 გრადუსს შორის).
ამრიგად, ფერმენტის ერთეულის განსაზღვრა უკეთესი იქნება, როგორც 1 ერთეული (U), წარმოადგენს ფერმენტის რაოდენობას, რომელიც აანალიზებს სტანდარტულ ნორმალურ პირობებში 1 მლნ ნატრიუმის რეაქციის რეაქციას.