როგორ გახადოთ ეს იმუნოჰისტოქიმიური შეფერხების ბუფერი
ფოსფატის ბუფერული სანელებლები (PBS) არის ბუფერული ხსნარი, რომელიც გამოიყენება იმუნოჰისტოქიმიური (IHC) შეღებვაზე და ხშირად გამოიყენება ბიოლოგიურ კვლევაში. PBS არის წყლის დაფუძნებული მარილი ხსნარი, რომელიც შეიცავს ნატრიუმის წყალბადის ფოსფატს, ნატრიუმის ქლორიდს და, ზოგიერთ შემთხვევაში, კალიუმის ქლორიდის და კალიუმის დიჰიდროგენის ფოსფატს.
იმუნოჰისტოქიმიური შეფერილობა
იმუნოჰისტოქიმია წარმოადგენს ანტიგენების გამოვლენის პროცესს, როგორიცაა ქსოვილის განყოფილების უჯრედებში პროტეინები ბიოლოგიური ქსოვილებში ანტისხეულების სპეციფიკისათვის ანტისხეულების პრინციპის გამოყენებით.
Immunofluorescent შეღებვა იყო პირველი იმუნოჰისტოქიმიური შეღწევადობის მეთოდი.
ანტიგენები გახდებიან ანტიგენის საწინააღმდეგო პრეპარატების გამოყენებით ანტიგენის საწინააღმდეგო სავალდებულო რეაქციის გამო ანტისხეულების საშუალებით. ეს პროცესი ხდება მაშინ, როდესაც ის ააქტიურებს ფლუორესცენციურ მიკროსკოპზე სპეციფიკური ტალღის სიხშირით.
ოსმოლარური და იონური კონცენტრაციები ადამიანის სხეულისა და მათი იზოტონური შეესაბამება.
რეცეპტი PBS- ისთვის
თქვენ შეგიძლიათ მოამზადოთ PBS რამდენიმე გზით. არსებობს მრავალი ფორმულები. ზოგი მათგანი არ შეიცავს კალიუმს, ზოგი კი შეიცავს კალციუმს ან მაგნიუმს .
ეს რეცეპტი შედარებით ადვილია. ეს არის 10X PBS საფონდო გადაწყვეტა (0.1M). თუმცა, თქვენ ასევე შეგიძლიათ 1X საფონდო გადაწყვეტა, ან დაიწყოს ამ 10X რეცეპტი და dilute მას 1X.
მთელი პროცესი დაახლოებით 10 წუთია.
ვარიანტია დაამატოთ Tween ასევე გათვალისწინებული.
რა დაგჭირდებათ იმისათვის, რომ გააკეთოთ PBS ბუფერი
- ნატრიუმის ფოსფატი მონოკაზიური (უწყლო)
- ნატრიუმის ფოსფატის დიბაზიური (უწყლო)
- ნატრიუმის ქლორიდი
- მასშტაბი და წონა კატარღები
- მაგნიტური შემდუღებელი და აურიეთ ბარი
- PH გამოძიება, რომელიც დაკალიბრებულია და შესაბამისი გადაწყვეტილებები pH- ის შესაცვლელად
- 1 ლ მოცულობითი ფაზა
- 20-დან 20-მდე (სურვილისამებრ)
როგორ ჩადება ფოსფატი Buffed Saline (PBS)
წონა 10.9 გრ-იანი ნატრიუმის ფოსფატური დიაბაზური (Na2HPO4), 3.2 გრამიანი ფოსფატის მონოკაზიური (NaH2PO4) და 90 გრ ნატრიუმის ქლორიდი (NaCl).
გადანერგილი წყლის ქვეშ 1L- ის ქვეშ.
შეცვალეთ pH to 7.4 და გამოსავალი მიიღოს საბოლოო მოცულობის 1L.
საჭიროების შემთხვევაში გამოიყენეთ 10X გამორთვა და შეცვალეთ pH.
შეგიძლიათ გააკეთოთ PBS გადაწყვეტა, რომელიც შეიცავენ 0.5% -ს შორის 20-დან 5 მლ-დან 20 ლ-მდე 1 ლ.
მინიშნებები მიღების PBS ბუფერი
შეინახეთ ბუფერული ოთახის ტემპერატურაზე, როდესაც თქვენ გააკეთეთ PBS გადაწყვეტა.
არაჰუმბათური რეაგენტები შეიძლება შეიცვალოს, მაგრამ თქვენ უნდა გაიაზროთ შესაბამისი მასა ყოველი დამატებითი წყლის მოლეკულების ჩასატარებლად.
ფოსფატის ჩამოსხმის სალათის გამოყენება (PBS)
ფოსფატიანი სანელებლები ბევრს იყენებს, რადგან ის უმეტეს უჯრედებში იზოტონური და არატოქსიკურია. ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას ნივთიერებების განზავებისათვის და ის ხშირად გამოიყენება საკნების კონტეინერებზე. PBS შეიძლება გამოყენებულ იქნეს სხვადასხვა მეთოდებისადმი, როგორც მშრალი ბიომელეკულაციისათვის, რადგან წყლის მოლეკულები მასში აგებულია ნივთიერება-ცილის გარშემო, მაგალითად. ეს იქნება "გამხმარი" და განუმეორებელი მყარი ზედაპირზე.
PH რჩება მყარი და თანმიმდევრული უჯრედების განადგურების თავიდან ასაცილებლად.
თხელი ფილმი წყლის, რომელიც ავალდებულებს ნივთიერება ხელს უშლის დენატრირების ან სხვა კონფორტული ცვლილებები. კარბონატის ბუფერი შეიძლება გამოყენებულ იქნას იმავე მიზნით, მაგრამ ნაკლებად ეფექტურობით.
PBS ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას მინიშნება სპექტრზე, როდესაც ელიფსომეტრიაში ცილის ადსორბციის საზომი.