Ისწავლეთ როგორ გააკეთოთ TAE ბუფერული რამდენიმე ნაბიჯი

ეს ბუფერი გამოიყენება DNA მოძრაობის შესასწავლად

TAE ბუფერული არის Tris ბაზის, ძმარმჟავისა და EDTA (Tris-acetate-EDTA) მიღებადი გადაწყვეტა. ეს ისტორიულად ყველაზე გავრცელებული ბუფერია, რომელიც გამოიყენება აგარის გელი ელექტროფორეზისთვის დნმ-ის პროდუქტების ანალიზში, რომელიც იწვევს PCR გაძლიერების, დნმ გამწმენდი პროტოკოლების ან დნმ კლონირების ექსპერიმენტებს.

ეს ბუფერული აქვს დაბალი იონური ძალა და დაბალი buffering მოცულობა. ეს საუკეთესოა DNA- ს დიდი (> 20 kb) ცალი ელექტროფორეზისთვის და უნდა ჩაანაცვლოს ხშირად ან ჩაირთოს (> 4 სთ) ლარი პერსპექტივაში.

ამის გათვალისწინებით, შეიძლება დაგჭირდეთ განიხილოს ბუფერის რამდენიმე პაკეტი.

იმის გათვალისწინებით, რომ ბუფერული ადვილია და ნაბიჯები შეიძლება სწრაფად ჩატარდეს, ხოლო ერთზე მეტი სურათების დროს არ უნდა იყოს განსაკუთრებით შრომატევადი ან გაძნელებული. ქვემოთ მოცემული ინსტრუქციის გამოყენებით, საჭიროა მხოლოდ 30 წუთი დასჭირდეს TAE ბუფერულს. აი როგორ:

მოამზადეთ EDTA- ს საფონდო გადაწყვეტა

EDTA (ეთილენინამიური tetraacetic მჟავა) გადაწყვეტა მზადდება ვადამდე. EDTA არ მიდის მთლიანად გადაწყვეტაში, სანამ pH არ არის მორგებული დაახლოებით 8.0. 0.5 მილიონ EDTA- ს 500 მილიმეტრიანი საექსპლუატაციოდ, EDTA disodium მარილის 93.05 გრამი შეადგინა (FW = 372.2). 400-მილილიტრიან წყალში დაიბლოკოს წყალი და შეასწორეთ pH ნატრიუმის ჰიდროქსიდით (NaOH). მაქსიმალური გადაწყვეტა 500 მლნ.

Whip Up საფონდო გადაწყვეტა TAE

TAE- ს კონცენტრირებული (50x) საფონდო ხსნარი გააკეთეთ 242 გრამი Tris- ის ბაზაზე (FW = 121.14) და დაითხოვოს იგი დაახლოებით 750 milliliters of deionized water.

ყურადღებით დაამატეთ 57.1 მლნ გლაზას მჟავას და 100 მლ-მდე 0.5 მ ექტს (pH 8.0). ამის შემდეგ, შეცვალოს გამოსავალი საბოლოო მოცულობის 1 ლიტრი. ამ საფონდო ხსნარი შეიძლება ჩაითვალოს ოთახის ტემპერატურაზე. ამ ბუფერის pH არ არის მორგებული და უნდა იყოს დაახლოებით 8.5.

მომზადება TAE- ს სამუშაო გადაწყვეტა

1x TAE ბუფერის სამუშაო გადაწყვეტა ხორციელდება დეზინფექციის წყლით 50x- ის მეშვეობით.

საბოლოო ხსნარის კონცენტრაციაა 40 მმ. Tris- აცეტატი და 1 მმ EDTA. ბუფერული მზად არის გამოიყენოს agarose ლარი.

რა გჭირდებათ ბუფერისთვის?

TAE ბუფერის მიღების შემდეგ მხოლოდ სწრაფი და მარტივი ინსტრუქციების მითითება მოითხოვს, რომ საჭიროა მასალების რაოდენობა, რომელიც არ არის გადაჭარბებული. თქვენ უბრალოდ საჭიროა EDTA disodium მარილი, Tris ბაზა და გლაციური ძმარმჟავა.

ბუფერის მიღებისას საჭიროა pH მეტრი და დაკალიბრების სტანდარტები. თქვენ ასევე გჭირდებათ 600 მილილიტრი და 1500 მილილიტრიანი შემკრები ან ჭურჭელი, ასევე დამთავრებული ცილინდრები. და ბოლოს, თქვენ დაგჭირდებათ დეონიზირებული წყალი, აურიეთ ბარები და აურიეთ ფირფიტები.

შეფუთვა

სად აპირებთ ბუფერის გაკეთებას - სასკოლო ადგილას, სამუშაო ადგილას ან სხვა ადგილას, როგორიც არის თქვენი სახლი? შეამოწმეთ ინვენტარი, სანამ დაიწყებთ დარწმუნდით, რომ თქვენ გაქვთ ყველა ზემოთ მასალა TAE ბუფერისათვის.

თუ ნეტავ არ უნდა გადაიხადოს მასალები, აირჩიოს ბუფერული გარეთ თქვენს სახლში რეკომენდირებულია. თქვენ შეგიძლიათ მარტივად შეუკვეთოთ მასალები, რაც გჭირდებათ ინტერნეტში ან ეწვიეთ სპეციალურ მაღაზიას მათთვის.