ეს ბუფერი გამოიყენება დნმ-ის ელექტროფორეზის გამოყოფისთვის
TBE ბუფერი განსაკუთრებით სასარგებლოა დნმ-ის მცირე ფრაგმენტების (MW <1000) გამოყოფისთვის, მაგალითად, შეზღუდული ფერმენტების დეზინფექციის მცირე პროდუქტები.
TBE- ს აქვს მეტი ბუფერული ტემპერატურა და უზრუნველყოფს უფრო მკაფიო რეზოლუციას, ვიდრე TAE ბუფერი . TAE ბუფერული არის Tris ბაზის, ძმარმჟავისა და EDTA (Tris-acetate-EDTA) მიღებადი გადაწყვეტა.
TBE ზოგადად უფრო ძვირია ვიდრე TAE და აფერხებს დნმ-ის ლიგასს, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს პრობლემები, თუ შემდგომი დნმ-ის გამწმენდი და ლიგატური ნაბიჯები განისაზღვრება. სამი მარტივი ნაბიჯი, რომელიც დაიცვას, ისწავლონ, თუ როგორ უნდა TBE ბუფერული. ეს ბუფერული შესაქმნელად არ უნდა აღემატებოდეს დაახლოებით 30 წუთს. აი როგორ:
მოამზადეთ EDTA- ს საფონდო გადაწყვეტა
EDTA (ეთილენინამიური ტეტრარაციული მჟავა) ხსნარი უნდა მომზადდეს წინასწარ. EDTA არ მიდის მთლიანად გადაწყვეტაში, სანამ pH არ არის მორგებული დაახლოებით 8.0. 0.5 მილიონ EDTA- ს 500 მილიმეტრიანი საექსპლუატაციოდ, EDTA disodium მარილის 93.05 გრამი შეადგინა (FW = 372.2). შემდეგ დაითხოვოს ის 400 მილილიტრიანი დეონიზირებული წყალი და შეცვალეთ pH NaOH. ამის შემდეგ, გამოსავალი 500 მლნ.
მომზადება ტუბერკულოზის საფონდო გადაწყვეტა
გააქტიურეთ TBE- ის კონცენტრატი (5x) საფონდო ხსნარი 54 გრ-ის ბაზაზე (FW = 121.14) და 27.5 გ ბორის მჟავა (FW = 61.83) და დაქორწინება დიონის წყალში 900 მლნ. შემდეგ დაამატეთ 20 მილიმეტრიანი 0.5 მ ეცტა (pH 8.0) და გამოსწორება 1 ლიტრიანი საბოლოო მოცულობით.
ეს ხსნარი შეიძლება შეიცავდეს ოთახის ტემპერატურას, მაგრამ ნალექები ხანმოკლე გადაწყვეტილებებში შეიქმნება. შეინახეთ ბუფერი შუშის ბოთლებში და გაუქმდეს თუ ნალექი ჩამოყალიბდა.
ტუბერკულოზის სამუშაოების მომზადება
აგარის გელი ელექტროფორეზისთვის, TBE ბუფერული შეიძლება გამოყენებულ იქნას 0.5x (კონცენტრატიანი შემადგენლობის 1:10 განზავების) კონცენტრაციით. ამოიღეთ საფონდო ხსნარი 10 დიონის წყალში. საბოლოო ხსნარის კონცენტრაციაა 45 მმ ტრისი-ბორატი და 1 მმ EDTA. ბუფერული მზად არის გამოიყენოს agarose ლარი .
რა გჭირდება
TBE ბუფერის შესაქმნელად საჭიროა მხოლოდ ოთხი ნივთიერება. დანარჩენი ნივთები ამ სიაში არის აპარატურა. საჭიროა ოთხი ნივთიერებები EDTA disodium მარილი, Tris ბაზა, ბორის მჟავა და დეონიზირებული წყალი.
რაც შეეხება ტექნიკას, საჭიროა pH მეტრი და დაკალიბრების სტანდარტები. გარდა ამისა, საჭიროა 600-მილილიტრი და 1500-მილიმეტრიანი შემკრები ან ჭურჭელი. დამონტაჟებულია თქვენი აპარატურის საჭიროებები დამთავრებული ცილინდრები და აურიეთ ბარები და აურიეთ ფირფიტები.
შეამოწმეთ ინვენტარი ლაბორატორიაში თქვენ უნდა იყენებთ, რათა დარწმუნდეთ, რომ ყველაფერი გჭირდებათ, სანამ დაიწყე. არაფერია უარესი, ვიდრე შეჩერება შუა მომზადება გამოსავალი იმიტომ, რომ თქვენ ამოიწურა სათანადო მასალები.
თუ თქვენი ლაბორატორია სკოლაში ან თქვენს სამუშაო ადგილზეა, შეამოწმეთ სათანადო პერსონალი იმისთვის რომ დაინახონ, რომ მათ აქვთ ყველა ელემენტი. ამით შეიძლება დაგჭირდეთ დროისა და ენერგიის დაზოგვა.